图5：RBP4在胰岛素介导的信号通路、肝脏PEPCK表达及肝糖元生成中的作用。a-d. 分别用盐水或胰岛素注射16周龄的RBP4-Tg型（a,c）和Rbp4－/－型（b,d）小鼠的肌肉（a,b）和肝脏（c,d），而后采用磷酸酪氨酸抗体进行免疫沉淀，检测PI(3)K（phosphatidylinositol 3-kinase三磷酸肌醇激酶）的活性（n=4只/盐水注射，n=6只/胰岛素注射）。一个星号表示存在显著差异（P<0.05）；两个星号表示与胰岛素注射的野生型（WT）存在极显著差异（P<0.01）。e.连续21天将纯的、人来源的RBP4腹腔注射到正常的FVB小鼠的肌肉和肝脏中，而后检测受到胰岛素刺激后PI(3)K的活性（n=4－9/不同条件下）。检测到的PI(3)K活性在用盐水注射的各组小鼠之间没有明显差别。用胰岛素注射后的数值与基准值（用盐水注射后测定的数值）之间用倍数关系表示。两个星号表示用RBP-4注射的小鼠与对照组之间存在极显著差异（P<0.01）。f,g.将纯的、人来源的RBP4注射到正常FVB小鼠的肌肉中，而后测定经胰岛素刺激后小鼠肌肉中IRS-1（Insulin Receptoe Substrate-1脂肪组织胰岛素受体底物1）上第612位酪氨酸的磷酸化情况(IRS1－pY612)(f)和IR上第972位酪氨酸的磷酸化情况（n=4-9只/不同条件下）。检测到的IR、IRS1上酪氨酸的磷酸化基准值（用盐水注射后测定的数值）在各对照组之间没有明显差别。数据取每个样品中发生指定位点磷酸化的蛋白与IRS1或IR蛋白总量的比例，使设计更严谨。实验组数值与基准值之间用倍数关系表示。两个星号表示实验组与对照组之间存在极显著差异。h.分别用饲料（n=6只）、高脂食物（HFD，n=9只）和含有0.04%（w/w）fenretinide的高脂食物(HFD+FEN，n=7只)喂养FVB小鼠，而后检测胰岛素刺激下其肌肉组织中IRS-1的酪氨酸的磷酸化情况。IRS1上酪氨酸的磷酸化基准值（用盐水注射后测定的数值）在各对照组之间没有明显差别。用胰岛素注射后的数值与基准值（用盐水注射后测定的数值）之间用倍数关系表示。星号表示注射了胰岛素的，用饲料或HFD+FEN喂养的小鼠与未注射盐水的、用饲料喂养的小鼠之间存在显著差异（P<0.05）；＃号表示用HDF喂养的小鼠与用饲料或HFD+FEN喂养的小鼠之间存在显著差异（P<0.05）。i.用纯的、人来源的RBP4注射正常FVB小鼠21天后，早上快速拉颈处死，而后用Northern 杂交法检测其肝脏中Pepck mRNA水平（n=8只/对照组，n=12只/实验组）。星号表示与对照组之间存在极显著差异（P<0.01）。j.用纯的、鼠来源的RBP4（100μg/ml）处理H4Ⅱe细胞18个小时，而后用抗鼠的PEPCK抗体进行western blotting,测定PEPCK蛋白表达水平。k.用纯的、鼠来源的RBP4处理H4Ⅱe细胞18个小时，同时用透析液处理相同时间作为对照组，然后用不同浓度的胰岛素分别处理实验组、对照组细胞3个小时，再测定葡萄糖的生成量（n=3只/不同条件下）。＃号表示用胰岛素处理过的细胞与未处理过的细胞在葡萄糖生成受抑制情况方面存在极显著差异（P<0.01）；星号表示在胰岛素作用浓度相同情况下，用RBP4作用的细胞和未用RBP4作用的细胞的葡萄糖生成量存在显著差异（P<0.05）。数值用平均值±标准误表示。